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DNA尿素PAGE电泳试剂盒图片
产品货号:
BTN90317
中文名称:
DNA尿素PAGE电泳试剂盒
英文名称:
One-Stop DNA Urea-PAGE Pack
产品规格:
30T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是专门用于DNA尿素-PAGE变性电泳的试剂盒。


  • 一站式,即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。
  • 安全,免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
  • 可用于DNA测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase保护实验等。
  • 电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。
  • 本制品足够30次mini尿素-PAGE胶(10cm×10cm)实验。
  • 本制品只能用于科研。



组分规格
尿素2×105g
丙烯酰胺:甲叉双丙烯酰胺(29:1),电泳级62g
TBE电泳液,10×250mL
TEMED1.5mL
过硫酸铵1g
2×尿素-PAGE变性胶上样液1.5mL

保存:常温,有效期一年,其中2×尿素-PAGE变性胶上样液收到后置于4℃保存。


一、PAGE浓度和交联度的选择指南
  1. 尿素-PAGE变性胶一般使用29:1(丙烯酰胺:甲叉双丙烯酰胺)的交联度,在此交联度的条件下,DNA片段长度和最适PAGE浓度对应关系如下:
    单链DNA长度最佳PAGE浓度二甲苯青FF迁移率对应的DNA长度溴酚蓝迁移率对应的DNA长度
    50~400nt8%160nt45nt
    200~1000nt5%260nt65nt
    750~2000nt3.5%460nt100nt


二、制备尿素-PAGE变性胶
此处以配制100mL尿素-PAGE变性胶为例,如果配制体积不同,则各成分用量需要按比例调整。
  1. 新鲜配制10%的APS(过硫酸铵):按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL去离子水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP管中,摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周,超过一周必须弃之不用。
  2. 配制40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(29:1,简称AB溶液,下同):在装有丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺干粉的250mL棕色塑料瓶中加入120mL自备的去离子水,颠倒摇晃溶解后,即得40%的AB溶液。
    注意:丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
  3. 配尿素-PAGE变性胶:在一个干净的250mL玻璃三角瓶中,按下表的用量加入各成分。
    注意:丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
    需要配制的PAGE胶浓度所需各成分的用量补水到
    尿素40%AB溶液10×TBE缓冲液
    5%42g12.5mL5mL100mL
    6%15.0mL
    7%17.5mL
    8%20.0mL
    9%22.5mL
    10%25.0mL
    11%27.5mL
    12%30.0mL

  4. 搅拌直到所有成分溶解,然后用滤纸过滤。
  5. 抽真空10~15分钟以去除溶液中的氧气,因为氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应。无条件抽真空也可以跳过此步。
  6. 加入500μL 10%APS和100μL TEMED后,迅速摇匀后灌胶。
  7. 在PAGE胶的液面距离达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
  8. 室温聚合30~60分钟。不能放低温,低温会抑制聚合反应。
  9. 拔出梳子,用0.5×TEB液冲洗加样孔。


三、DNA样品的准备
  1. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品:将样品跟2×尿素-PAGE上样液1:1混合,95℃ 3分钟变性,然后放冰上待用。
  2. 对TGGE样品:可以不加上样液直接放冰上待用。


四、电泳
  1. 将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
  2. 预电泳30分钟,使得PAGE胶发热后,将冰上放置的样品上样。
  3. 连接电源线,打开电源开关。根据胶的大小选择固定功率进行电泳。固定功率等于固定产热,这样就不容易发生过热而发生PAGE胶板破裂的现象。如果固定电流或电压,产热将随电泳时间而变化,不好控制。对小胶一般用5-6W的固定功率,大胶用15-25W的固定功率。
  4. 终止电泳,取出凝胶进行后续的处理(如银染)。
    注意:如果银染,必须延长固定时间以便让洗出尿素,否则胶中残留的尿素会严重干扰后面的银染。

相关搜索:DNA尿素PAGE电泳试剂盒尿素PAGEDNA电泳One-Stop DNA Urea-PAGE Pack
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