产品货号：
BTN90317
中文名称：
一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
英文名称：
One-Stop DNA Urea-PAGE Pack
产品规格：
30次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是专门用于DNA尿素-PAGE变性电泳的试剂盒。
保存：常温，有效期一年，其中2×尿素-PAGE变性胶上样液收到后置于4℃保存。
一、PAGE浓度和交联度的选择指南
二、制备尿素-PAGE变性胶
此处以配制100mL尿素-PAGE变性胶为例，如果配制体积不同，则各成分用量需要按比例调整。
三、DNA样品的准备
四、电泳
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- 一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
- 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
- 可用于DNA测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase保护实验等。
- 电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。
- 本产品足够30次mini尿素-PAGE胶（10cm×10cm）实验。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 尿素 | 2×105g |
| 丙烯酰胺:甲叉双丙烯酰胺(29:1)，电泳级 | 62g |
| TBE电泳液，10× | 250mL |
| TEMED | 1.5mL |
| 过硫酸铵 | 1g |
| 2×尿素-PAGE变性胶上样液 | 1.5mL |
保存：常温，有效期一年，其中2×尿素-PAGE变性胶上样液收到后置于4℃保存。
一、PAGE浓度和交联度的选择指南
- 尿素-PAGE变性胶一般使用29:1（丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺）的交联度，在此交联度的条件下，DNA片段长度和最适PAGE浓度对应关系如下：
单链DNA长度 最佳PAGE浓度 二甲苯青FF迁移率对应的DNA长度 溴酚蓝迁移率对应的DNA长度 50～400nt 8% 160nt 45nt 200～1000nt 5% 260nt 65nt 750～2000nt 3.5% 460nt 100nt
二、制备尿素-PAGE变性胶
此处以配制100mL尿素-PAGE变性胶为例，如果配制体积不同，则各成分用量需要按比例调整。
- 新鲜配制10%的APS（过硫酸铵）：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL去离子水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周，超过一周必须弃之不用。
- 配制40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（29:1，简称AB溶液，下同）：在装有丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺干粉的250mL棕色塑料瓶中加入120mL自备的去离子水，颠倒摇晃溶解后，即得40%的AB溶液。
注意：丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。 - 配尿素-PAGE变性胶：在一个干净的250mL玻璃三角瓶中，按下表的用量加入各成分。
注意：丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。需要配制的PAGE胶浓度 所需各成分的用量 补水到 尿素 40%AB溶液 10×TBE缓冲液 5% 42g 12.5mL 5mL 100mL 6% 15.0mL 7% 17.5mL 8% 20.0mL 9% 22.5mL 10% 25.0mL 11% 27.5mL 12% 30.0mL - 搅拌直到所有成分溶解，然后用滤纸过滤。
- 抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气，因为氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应。无条件抽真空也可以跳过此步。
- 加入500μL 10%APS和100μL TEMED后，迅速摇匀后灌胶。
- 在PAGE胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
- 室温聚合30～60分钟。不能放低温，低温会抑制聚合反应。
- 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。
三、DNA样品的准备
- 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟2×尿素-PAGE上样液1:1混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。
- 对TGGE样品：可以不加上样液直接放冰上待用。
四、电泳
- 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
- 预电泳30分钟，使得PAGE胶发热后，将冰上放置的样品上样。
- 连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择固定功率进行电泳。固定功率等于固定产热，这样就不容易发生过热而发生PAGE胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热将随电泳时间而变化，不好控制。对小胶一般用5-6W的固定功率，大胶用15-25W的固定功率。
- 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理（如银染）。
注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则胶中残留的尿素会严重干扰后面的银染。
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